關(guān)于二氧化碳培養(yǎng)箱的觀點(diǎn)

主支細(xì)胞培養(yǎng)室

CO2培養(yǎng)箱/新Brunswick S41i / Eppendorf   
CO2培養(yǎng)箱/ CO2CELL BMT USA 

實(shí)驗(yàn)室經(jīng)理根據(jù)經(jīng)驗(yàn)和個(gè)人品味指定這些設(shè)計(jì)。在水套培養(yǎng)箱中工作良好的方法很可能保留在這種類型的設(shè)備中。

水夾套培養(yǎng)箱以溫度穩(wěn)定性而聞名,但是比直接加熱單元更慢地回到溫度設(shè)定點(diǎn),比如打開(kāi)門(mén)之后。在電源故障的情況下,水套培養(yǎng)箱保持更長(zhǎng)時(shí)間,但在電源恢復(fù)后需要更長(zhǎng)時(shí)間才能恢復(fù)到設(shè)定點(diǎn)。由于水套,它們對(duì)于給定的工作體積也更大和更重。

水套單元的維護(hù)也有些復(fù)雜。用戶必須向夾套水中添加除藻劑,這些培養(yǎng)箱不能采用高熱消毒。無(wú)論如何,實(shí)驗(yàn)室傾向于堅(jiān)持過(guò)去的工作,這保證了盡管失去了直接加熱培養(yǎng)箱的一些市場(chǎng)份額,對(duì)水套裝置的需求不會(huì)很快消失。

許多直接加熱孵育器現(xiàn)在是無(wú)風(fēng)扇的,這提供了幾個(gè)好處。BMT USA(蒙羅,華盛頓州)科學(xué)部門(mén)業(yè)務(wù)發(fā)展經(jīng)理Rick Ellison解釋說(shuō):“通過(guò)自然對(duì)流移動(dòng)空氣而不是通過(guò)風(fēng)扇強(qiáng)迫空氣移動(dòng),可以減少冷凝和交叉污染。無(wú)風(fēng)扇設(shè)計(jì)還通過(guò)消除清潔進(jìn)入空氣的HEPA過(guò)濾器的替換來(lái)減少維護(hù),因此消除了由風(fēng)扇本身引起的任何清潔或污染問(wèn)題。

使用培養(yǎng)箱,機(jī)械復(fù)雜性越小越好。“其他設(shè)計(jì)可能同樣有效,但他們引入更多的變量,”埃里森說(shuō)。“變量越少,出現(xiàn)錯(cuò)誤的可能性越低。

 

設(shè)置,保養(yǎng),使用

物理位置是確保二氧化碳培養(yǎng)箱高性能的關(guān)鍵。Eppendorf(Enfield,CT)的產(chǎn)品經(jīng)理Lynn Philip建議保持培養(yǎng)箱遠(yuǎn)離通風(fēng)口和陽(yáng)光直射,這兩個(gè)因素都會(huì)產(chǎn)生大氣變化,從而影響培養(yǎng)箱并縮短其使用壽命。“通風(fēng)吃水也攜帶細(xì)菌和真菌污染物,”菲利普警告。

CO2培養(yǎng)箱/ CellIQ™/ Panasonic Healthcare /  
無(wú)論使用中央氣體系統(tǒng)還是單個(gè)氣體罐,用戶都應(yīng)在CO2入口安裝在線壓力調(diào)節(jié)器,以確保氣體以推薦的方式供應(yīng)**小壓力。根據(jù)菲利普,根據(jù)**佳壓力可能導(dǎo)致性能降低和恢復(fù)緩慢,而太高的壓力可能損壞氣體系統(tǒng)。“另外,盡量減少開(kāi)門(mén)的頻率和長(zhǎng)度,以保持**佳的細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境,”她說(shuō)。“分開(kāi)的內(nèi)門(mén)可以減少開(kāi)門(mén)過(guò)程中文化氣氛的損失。

現(xiàn)在幾乎所有的培養(yǎng)箱都配備了自清潔技術(shù)。**常用的是高熱消毒,這是免費(fèi)的。對(duì)于常規(guī)維護(hù),飛利浦建議用70%異丙醇或制造商推薦的消毒劑清潔。

保持衛(wèi)生

說(shuō)污染和/或交叉污染是什么時(shí)候的問(wèn)題,而不是如果變成陳腔濫調(diào)。所有更多的理由實(shí)驗(yàn)室為這種可能性做準(zhǔn)備。

埃利森推薦的系統(tǒng)具有“強(qiáng)大的滅菌,而不僅僅是凈化”。BMT的滅菌技術(shù)的選擇是干熱高溫的應(yīng)用,但其他方法可能是有效的。不管選擇什么方法,它應(yīng)該是盡可能自動(dòng)化的(因此是防錯(cuò)的)。高熱比較低溫化學(xué)或過(guò)氧化氫滅菌需要更長(zhǎng)時(shí)間,但實(shí)際上不需要用戶干預(yù)。

CO2培養(yǎng)箱/ C和CB系列BINDER / 
硼硅酸鹽玻璃培養(yǎng)管Denville Scientific 

過(guò)氧化氫滅菌可以基于減少的停機(jī)時(shí)間來(lái)證明。該技術(shù)涉及將過(guò)氧化物氣體引入室中,然后使其循環(huán)通過(guò)內(nèi)部鼓風(fēng)機(jī)。該技術(shù)與熱相比的缺點(diǎn)是表面和內(nèi)部必須與氣體接觸。**終操作涉及用窄帶寬紫外光激活。制造商聲稱不需要高壓滅菌,因?yàn)樗薪M分在整個(gè)過(guò)程中保留在外殼內(nèi)。但正如埃里森所指出的,過(guò)氧化物滅菌留下一些殘留的無(wú)菌水,長(zhǎng)期不保持原始狀態(tài),需要人工去除。然而,制造商要求用于過(guò)氧化氫滅菌的約2小時(shí)的停機(jī)時(shí)間,對(duì)于高熱量的14小時(shí)。

Binder公司(Bohemia,NY)的總裁Uwe Ross將目前正在進(jìn)行的污染討論比作“打死一匹死馬”。但是去污方法的擴(kuò)散表明問(wèn)題仍未解決。“就個(gè)人而言,我相信在180°C的熱空氣滅菌是**真正有效的方法,但即使這種技術(shù)也無(wú)法解決使用過(guò)程中滅菌后發(fā)生的情況。

污染來(lái)自生物體沉積在表面上并在冷凝的輔助下生長(zhǎng)。這導(dǎo)致將工作表面積減小到****小值的設(shè)計(jì)方法; 較少的表面等于微生物生長(zhǎng)的較少空間。

二氧化碳培養(yǎng)箱將做它的工作,以保護(hù)實(shí)驗(yàn)或過(guò)程,但只有當(dāng)操作者遵循**佳實(shí)踐。在其細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)秀引物中,Invitrogen提出以下污染預(yù)防劑:

  • 用70%乙醇擦拭手,工作區(qū)域和進(jìn)入工作區(qū)域的任何東西。
  • 避免直接從其工廠容器中倒入介質(zhì)和試劑,并在使用后立即重新密封瓶子。
  • 遵循良好的移液實(shí)踐:如有疑問(wèn),請(qǐng)丟棄。
  • 保持瓶子,瓶子和盤(pán)子覆蓋,直到使用; 休息帽與他們的頂部。
  • 只能使用無(wú)菌玻璃器皿和設(shè)備。
  • 在工作時(shí)消除無(wú)償呼氣(唱歌,哨聲),并盡可能快地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

購(gòu)買(mǎi)時(shí)要考慮的因素

“回顧短期和長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞培養(yǎng)需求,以確定購(gòu)買(mǎi)的關(guān)鍵因素,”菲利普說(shuō)。所有培養(yǎng)箱都可以控制溫度,CO 2和可能的O2,但單位可能在設(shè)計(jì)和性能上有顯著差異。如果污染是一個(gè)問(wèn)題,實(shí)驗(yàn)室經(jīng)理應(yīng)特別注意培養(yǎng)箱的設(shè)計(jì)和時(shí)間拆卸,清洗,重新組裝和消毒。“了解未來(lái)的要求,因?yàn)?a href="http://m.nbht168.cn/">CO2培養(yǎng)箱是一項(xiàng)長(zhǎng)期投資,”Philip繼續(xù)說(shuō)。“必須評(píng)估頭五年的總體擁有成本,包括初始價(jià)格,安裝,燃?xì)馐褂?,清潔的時(shí)間和人力,常規(guī)備件等,以確定**佳的價(jià)值。

CO2培養(yǎng)箱/ Heracell™240i / Thermo Fisher Scientific
制造商和**終用戶強(qiáng)調(diào)溫度均勻性和恢復(fù)到設(shè)定條件。Thermo Fisher Scientific(Asheville,NC)全球細(xì)胞培養(yǎng)**Mary Kay Bates鼓勵(lì)買(mǎi)家調(diào)查這些性能因素。“請(qǐng)查看溫度映射和恢復(fù)數(shù)據(jù)。

在考慮回收時(shí),說(shuō)明參數(shù)是溫度,氣氛組成和濕度。“濕度是性能的關(guān)鍵,而不是每個(gè)人都喜歡,”貝茨補(bǔ)充說(shuō)。

濕度防止水從培養(yǎng)基中蒸發(fā),這導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)物,礦物質(zhì)和其他培養(yǎng)基成分變得更濃。“這可能會(huì)導(dǎo)致性能不佳,甚**死亡,”貝茨說(shuō)。

在80%濕度下,蒸發(fā)比在95%濕度下高四倍,這說(shuō)明為什么濕度是**。大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室中發(fā)現(xiàn)的低濕度,空調(diào)環(huán)境空氣加劇了這種影響。

精確的氧氣控制已成為現(xiàn)代培養(yǎng)箱工作的另一個(gè)必要條件,特別是對(duì)于缺氧(低氧)培養(yǎng)物。生物體內(nèi)的氧氣水平比大氣中的21%水平低得多。此外,所有電池具有獨(dú)特的氧氣需求。肝,腎和心臟細(xì)胞在生物體內(nèi)在獨(dú)特氧水平下**佳地發(fā)揮功能,其甚**可在器官內(nèi)改變。例如,肝細(xì)胞需要介于4%和12%之間,這取決于它們與含氧毛細(xì)血管的接近程度。神經(jīng),乳腺癌和免疫細(xì)胞將遷移遠(yuǎn)離氧梯度,但中G倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞用于生物制造不會(huì)。隨著研究人員越來(lái)越需要幾乎沒(méi)有氧氣存活的細(xì)胞,對(duì)微調(diào)氧水平的需求從未如此之大。

IPSC的衍生神經(jīng)細(xì)胞/ AMSBIO / 
“缺氧文化要求在整個(gè)氧氣均勻,以保證底部貨架上的細(xì)胞接收相同濃度的中部或上部架細(xì)胞,”貝茨說(shuō)。“你想盡可能重復(fù)生理?xiàng)l件。

除了溫度均勻性和關(guān)鍵培養(yǎng)條件的恢復(fù),Bates建議購(gòu)買(mǎi)者考慮自動(dòng)消毒,以節(jié)省與手動(dòng)清潔和高壓滅菌相關(guān)的時(shí)間和成本。例如,大型細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)器使用自動(dòng)化就地清洗或現(xiàn)場(chǎng)蒸汽技術(shù); 培養(yǎng)箱使用化學(xué)品和/或熱。一些設(shè)計(jì)要求使用者去除內(nèi)部部件并且單獨(dú)地清潔或高壓滅菌它們,而在其它設(shè)計(jì)中,部件被消毒就位。無(wú)論消毒方案如何,其本身不應(yīng)引起污染或細(xì)胞損傷的風(fēng)險(xiǎn)。