初代培養(yǎng)的一般原則是:
(1)先將標(biāo)本涂片染色直接鏡檢,指導(dǎo)培養(yǎng)基的選擇。 (2)盡量選用在厭氧菌中覆蓋面寬的非選擇性培養(yǎng)基。 (3)**好多選1~2種覆蓋面不同的選擇性培養(yǎng)基。 (4)盡量保證培養(yǎng)基新鮮。
(5)要考慮到微需氧菌存在的可能。
1.選用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基接種:應(yīng)接種固體和液體兩種培養(yǎng)基; (1)培養(yǎng)基的使用,應(yīng)注意下列各點: 1)盡量使用新鮮培養(yǎng)基,2~4h內(nèi)用完;
2)應(yīng)使用預(yù)還原培養(yǎng)基,預(yù)還原24~48h更好;
3)可采用預(yù)還原滅菌法制作的培養(yǎng)基(用前于培養(yǎng)基中加入還原劑,如L-半胱氨酸、硫乙醇酸鈉、維生素C及葡萄糖等,盡可能使預(yù)還原劑處于還原狀態(tài)); 4)液體培養(yǎng)基應(yīng)煮沸10min,以驅(qū)除溶解氧,并迅速冷卻,立即接種; 5)培養(yǎng)厭氧菌的培養(yǎng)基均應(yīng)營養(yǎng)豐富,并加有還原劑與生長刺激因子(血清、維生素K、氯化血紅素、聚山梨酯-80等)。
(2)培養(yǎng)基的選擇:初次培養(yǎng)一般都使用選擇培養(yǎng)基和非選擇培養(yǎng)基。
1)非選擇培養(yǎng)基:本培養(yǎng)基使分離的厭氧菌不被抑制,幾乎能培養(yǎng)出所有的厭氧菌。常使用心腦浸液瓊脂(BHI)、布氏瓊脂(BR)、胰豆胨肝粉瓊脂(GAM)、胰胨酵母瓊脂(EG)、CDC厭氧血瓊脂等。
2)選擇培養(yǎng)基:為有目的選擇常見厭氧菌株,以便盡快確定厭氧的種類。
2.每份標(biāo)本**少接種3個血平板,分別置于有氧,無氧及5%~10à2環(huán)境中培養(yǎng),以便正
確地培養(yǎng)出病原菌,從而判斷其為需氧菌、兼性厭氧菌、微需氧菌或厭氧菌中的哪一類。 3.厭氧培養(yǎng)法 (1)厭氧罐培養(yǎng)法。 (2)氣袋法。 (3)氣體噴射法:又稱轉(zhuǎn)管法。 (4)厭氧手套箱培養(yǎng)法:是迄今厭氧菌培養(yǎng)的**佳儀器之一。 (5)其他培養(yǎng)法:平板焦性沒食子酸法;生物耗氧法;高層瓊脂培養(yǎng)法。 4.厭氧狀態(tài)的指示:美藍(lán)和刃天青。無氧時均呈白色,有氧時美藍(lán)呈藍(lán)色,刃天青呈粉紅色。 5.分離培養(yǎng)厭氧菌失敗的原因:①培養(yǎng)前未直接涂片和染色鏡檢;②標(biāo)本在空氣中放置太久或接種的操作時間過長;③未用新鮮配制的培養(yǎng)基;④未用選擇培養(yǎng)基;⑤培養(yǎng)基未加必要的補充物質(zhì);⑥初代培養(yǎng)應(yīng)用了硫乙醇酸鈉作為**厭氧菌培養(yǎng)基;⑦無合適的厭氧罐或厭氧裝置漏氣;⑧催化劑失活;⑨培養(yǎng)時間不足;⑩厭氧菌的鑒定材料有問題。